鱟試驗(yàn)法種類及比較

根據(jù)反應(yīng)機(jī)理的不同又可將鱟試驗(yàn)法分為以凝膠的形成作為指標(biāo)的凝膠法，以凝膠的濁度變化作為指標(biāo)的比濁法以及顯色合成基質(zhì)水解顯色作為指標(biāo)的比色法，其中以定性的凝膠法收載最為普通（表3）。

根據(jù)反應(yīng)機(jī)理的不同，主要可分為以下幾類：

（1）凝膠法（Gel-Clot technique）：可在0.03Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行半定量測定。

（2）比濁法（Turbidimetric Assay）：通常在0.006 ~ 300Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行定量。

（3）比色法（Colorimetric Assay）：操作比較復(fù)雜，但靈敏度和精確度高。通常在0. 006~15Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行定量。

（4）ELISA（Enzyme-Linked immunosorbent assay）：用鱟試劑與酶聯(lián)吸附免疫測定法聯(lián)合檢定微量內(nèi)毒素的方法。

（5）以巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞分裂素（Cytodines）：作為機(jī)體反應(yīng)指標(biāo)的熱原檢查系統(tǒng)。

凝膠法：即在100 x 75mm的小試管內(nèi)，加入待檢樣品的鱟試劑混合。37℃60分鐘保溫反應(yīng)后，180°倒轉(zhuǎn)，根據(jù)凝膠形成的有無作為判定指標(biāo)的一種半定量法。此法操作比較簡單、經(jīng)濟(jì)，而且不需要專用測定儀器。可在0.03Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行半定量測量。

比濁法：根據(jù)內(nèi)毒素與鱟試劑的（C因子）反應(yīng)機(jī)理，被激活的凝固酶切斷凝固蛋白原中特定位置的精氨肽鏈。形成凝固蛋白，產(chǎn)生凝膠的濁度變化，適當(dāng)?shù)臐岫葴y定儀進(jìn)行定量的一種方法。可分為Endopoint Assay和Kinetic turbidimetric Assay。此法操作簡單、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高、檢測范圍廣。通常在0. 006~300ET/ml的范圍同時(shí)進(jìn)行定量。但需要專用儀器。

比色法：根據(jù)被內(nèi)毒素激活的凝固酶水解鱟三肽中精氨酸肽鏈。釋放出對硝基苯胺（PNA黃色A405nm）用冰醋酸中止反應(yīng)進(jìn)行吸光度測定，或用游離的PNA和偶氮試劑反應(yīng)，最終形成偶氮藍(lán)復(fù)合物顯色（紅色A 545nm）而進(jìn)行比色測定的一種方法。可分為Endopoint Assay和Kinetic turbidimetricAssay。此法操作比較復(fù)雜。但靈敏度、定量性和精度都高。通常在0. 006 ~15Eu/ml的范圍內(nèi)進(jìn)行定量，而且更微量的內(nèi)毒素也可定量。目前主要用在血液﹑體液中的微量內(nèi)毒素的測定方面。