鱟試驗法在藥物內毒素含量檢測中的應用探究

在藥物質量控制中，內毒素含量的檢測至關重要。鱟試驗法（LT法）在檢測藥物內毒素方面有著獨-特的地位。

美國FDA已將LT法確定為法定的藥物內毒素檢測方法。當應用鱟試劑進行檢測時，其敏感性不得低于0.2EU/mL，并且要充分考慮藥物中內毒素的耐受限-量（Tolerance limit），這個限-量等于每mg或每ml產物中內毒素的允許量。

對于藥物的內毒素檢測，如果一種藥品未通過LT法檢測，即便通過了RT法（家兔熱原試驗，Rabbit pyrogen test），除RT法由官-方進行的情況外，這種藥物也不能出廠。

某些藥物，特別是那些已知有抑制或增強LT反應的藥物，必須進行抑制/增強試驗。

一、抗生素內毒素含量的LT法檢測

1、多數抗生素適用LT法

應用LT法檢測抗生素中內毒素的含量是非常適宜的。大多數常用的抗生素，如林可霉素、氯霉素、慶大霉素、雙氫鏈霉素、乳酸鹽紅霉素等并不抑制LT反應，所以可以直接采用LT法進行測定。

2、部分抗生素需特殊處理

然而，有一些抗生素溶液能抑制LT反應，在這種情況下必須進行抑制試驗。具體做法是用足量的無熱原水進行稀釋，直至達到該抗生素不能抑制LT凝膠作用的最高濃度后再進行試驗。由于這些抗生素可能抑制LT反應，所以采用的鱟試劑的敏感度必須等于或超過藥典規定的熱原試驗的敏感度。

在能抑制LT反應的藥物中，青霉素類藥物較為典型。其抑制機理目前尚不明確，一種觀點認為青霉素對細菌細胞壁所含的酶起作用；另一種觀點認為青霉素對LT凝膠形成的抑制作用與它們的血清蛋白結合率有顯著相關（p < 0.01）。例如BRL1071青霉素，其血清蛋白結合率最高，對LT反應的抑制作用也最-強，僅需1.5mmol就能起抑制作用。鹽酸四環素對LT反應也有抑制作用，原因是抗生素溶液pH過低（約4）。

值得注意的是，用LT法測定抗生素中內毒素含量比RT法敏感10 - 100倍。

二、抗腫瘤藥物內毒素含量的LT法檢測

1、內毒素污染的風險

腫瘤化學療劑的副反應較多，有些與應用內毒素后的反應相似，所以其不良反應可能是由于內毒素污染造成的。例如，左旋門冬酰胺酶由大腸桿菌或歐氏（Erwinia）植病桿菌制備，由大腸桿菌制備的門冬酰胺酶每1000單位含內毒素超過1ng，由歐氏桿菌制備的酶中也發現有微量內毒素；博萊霉素、柔紅霉素、長春新堿等藥品也存在少量內毒素，一般為0.1 - 5ng/ml。

2、 LT法的適用性

因為有些抗腫瘤藥有細胞毒性，不宜采用RT法，所以LT法用于抗腫瘤藥物中內毒素的檢測是可行且適宜的。在實際操作中，試管法仍然是最-實-用的方法。

綜上所述，鱟試驗法（LT法）在藥物內毒素檢測中有著不可替代的作用，無論是常見抗生素還是抗腫瘤藥物，都需要依據其特性準確運用LT法來確保藥物內毒素含量在安全范圍內。