細菌內毒素（脂多糖）的提取之PCP法、高壓超聲處理法及DMSO法的介紹

一、苯酚╱氯仿╱石油醚法（PCP）

LPS分子鑲嵌于胞壁的外膜中，用某些化學試劑將胞壁裂解（如酚）后，LPS分子從破潰的胞壁中游離出來。由于LPS是一種兩性分子，故它們在不同溶劑中的溶解度，*取決于該分子上的親水/疏水性基團的多少。S-LPS有完整的親水性О特異性側鏈，所以S型LPS屬親水性分子。而R型LPS，缺乏O特異性側鏈，含有完整或不完整的核心多糖和完整的類脂A，親水度不大，而易溶于有機溶劑中，故而R-LPS用酚水法提取時所得的產量極低。

PCP法是以90%苯酚、氯仿及石油醚（40～60℃）以2：5：8所組成的單相混合提取液，這一提取方法只能將LPS及與之緊密結合的透道蛋白（Porin）提取出來，而其它成分則排除在提取液外。PCP法的水沉淀步驟僅能使LPS發生沉淀，而透道蛋白仍溶于苯酚中，故而PCP法所提取的LPS是一種較為純化的制劑。

PCP法對制取R型細胞的LPS產量十分滿意，且無核酸污染，蛋白質含量也僅在0.1～1 %間，該法溫和，在室溫5～20℃即可完成，制取周期較短，適用于從R_a至R_e的細菌，可成功地提取R-LPS，產量也相當高。故PCP法是研究R-LPS的有用方法。應必須注意的是在PCP法中，每一步操作均不應使用鹽類，如MgCl₂、CaCl₂，否則會嚴重影響產量。

二、高壓超聲處理法

以某些物理方法（如超聲波）處理菌體細胞，使其*破裂，可增加繼后提取方法的*性，從而可使LPS的產率增加。Richard1983研制了一種既可提取光滑型又可提取粗糙型LPS的新方法。該方法采用了高壓處理（15000Ib/in²）細菌的方法，粉碎菌細胞，繼又用超聲波處理，促進碎片*裂解，再以DNa s e，RNa s e處理，消化核酸。再加入蛋白酶去消化蛋白質，離心12000xg，濃縮干燥。如此制得的LPS，產量為菌體的51～81%（按測脂肪酸、庚糖和KDO值），蛋白質為0.1%、核酸1 %、脂類2～5%，純度較高，產量比酚水法高7倍，比PCP法高2倍。

所得LPS經各種免疫化學分析，均提示用此方法提取的LPS其抗原結構完整。其不足之處是堿性條件上的加熱，以前認為這一處理在于除掉蛋白質，特別是對于有些細菌（如綠膿桿菌）有用，但對別的細菌恐屬多余。應當指出的一點是，堿性加熱條件使類脂體A上的脂肪酸酯降解。另外一個不足之處是，此方法較為復雜，不易被一般實驗室采用。

三、DMSO法

Adams介紹了一種較為簡單的LPS提取方法。該法應用二甲亞砜（Dimethyl Sulfoxide，DMSO）作為主要提取試劑。以胞壁原料提制LPS。主要步驟為將預先制取的干燥胞壁以60℃DMSO提取水洗，酸化丙酮處理，冷凍干燥。DMSO法提取的LPS產量是酚水法的10倍，但蛋白質含量很高（45%） 。